В 2025 году журналу
ИСПОЛНИЛОСЬ
95 ЛЕТ!

ЧИТАЙТЕ
Материалы к юбилею >>>

РУБРИКИ

Творчество
наших читателей

ЧИТАЙТЕ
Автор С.И. КАЛИНИЧЕНКО
ГИМН СВИНЬЕ >>>

DOI: 10.37925/0039-713X-2025-7-8-65-68
УДК 619:616.98
ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСА БОЛЕЗНИ АУЕСКИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НЕСКОЛЬКИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СИСТЕМ

А.Н. СКВОРЦОВА, мл. научный сотрудник, В.В. МИХАЙЛОВА, мл. научный сотрудник, М.С. ШИШКИНА, мл. научный сотрудник, Т.П. ЛОБОВА, кандидат биолог. наук, ст. научный сотрудник, e-mail: nefedovi5748@gmail.com, отдел вирусологии ИЦНМВЛ, ФГБУ «ВНИИЗЖ»

Статья посвящена изучению биологических свойств двух изолятов вируса болезни Ауески, выделенных от домашних животных, а также патологоанатомических изменений в культуре при постановке опытов на кроликах. По результатам работы дана оценка современных методов диагностики данного заболевания.

Ключевые слова: болезнь Ауески, перевиваемые клеточные культуры, почка теленка, Таурус-1, биопроба на кроликах, изоляты вируса, ПЦР.

Isolation of Aujeszky's disease virus using multiple biological systems

А.N. SKVORTSOVA, junior researcher, V.V. MIKHAILOVA, junior researcher, M.S. SHISHKINA, junior researcher, T.P. LOBOVA, candidate of biological sciences, senior researcher, e-mail: nefedovi5748@gmail.com, department of virology TCSMVL, ARRIAH

The article is devoted to the study of biological properties, two isolates of the Aujeszky's disease virus, isolated from domestic animals, as well as pathological changes in the culture when setting up a bioassay on rabbits. Based on the results of the work, an assessment of the diagnostic innovation of some methods for diagnosing this disease is given.

Key words: Aujeszky's disease, transplantable cell cultures, calf kidney, Taurus-1, bioassay on rabbits, virus isolation, PCR.

Введение

Болезнь Ауески (псевдобешенство) – остропротекающая болезнь, которую вызывает вирус, относящийся к роду Varicellovirus семейства Orthoherpesviridae. По данным Международного комитета по таксономии вирусов, в 2024 году ему было присвоено новое название ‒ Varicellovirus suidalpha 1, сменившее его прежнее название ‒uid herpesvirus 1 (SuHV-1).

Вирус болезни Ауески обнаружен у различных диких животных, включая кабанов, оленей, крыс, медведей, енотов, иберийских рысей, волков, летучих мышей, лисиц, пантер и прочих, а также у домашних и сельскохозяйственных животных, таких как собаки, крупный рогатый скот, мелкий рогатый скот, свиньи, кошки, норки, ондатры и др. Домашние свиньи (Sus scrofa domesticus) и дикие кабаны (Sus scrofa), представители семейства свиней (Suidae), признаны естественными хозяевами и единственными латентными носителями. Кроме того, инфекция PRV также представляет потенциальную угрозу для человека. Так, имеются литературные данные об эпизоотии высоковирулентным штаммом, который одновременно поражал людей, собак, кошек и свиней [3, 6, 7].

Клинические признаки варьируют в зависимости от возраста и физиологического состояния инфицированного животного. У поросят отмечают нарушения нервной системы (круговое движение и судороги), которые вскоре приводят к смерти. У больных свиней регистрируют гипертермию (до 40‒41°С), угнетенное состояние, отказ от корма, тахипноэ, беспокойство, нарушение координации движения. У супоросных свиноматок вирус проходит через плаценту, что приводит к мумификации плода или абортам. Во время острых вспышек заболевания смертность среди новорожденных поросят достигает 90‒100%, среди поросят первого месяца жизни ‒ 60%. С увеличением возраста животных проявление клинических признаков и уровень смертности уменьшаются [8, 9].

Российская Федерация стационарно неблагополучна по данному возбудителю. Однако ветеринарными лабораториями проводится мониторинг данного заболевания с использованием следующих методов диагностики: ИФА, ПЦР, РНГА, РН, РИФ, выделение вируса в культуре клеток, биопроба [2, 5].

Биопробу проводят с целью выделения вируса болезни Ауески, как правило, с использованием лабораторных животных ‒ кроликов. Этот метод применяют все ветеринарные лаборатории РФ. Он зарекомендовал себя как простой и достаточно чувствительный способ индикации вируса в патологическом материале. Кроликам внутримышечно вводят суспензию паталогического материала (головной мозг, легкие, печень, селезенка) от павших или убитых животных. При наличии вируса у животных появляются клинические признаки (расчесы, зуд) и через 2‒10 суток наступает смерть [1, 4, 10].

ФГБУ «ВНИИЗЖ» использует многие современные методы диагностики болезни Ауески. Постановка биопробы пока остается на вооружении в лабораторной практике. В начале 2025 года в отделе вирусологии ИЦНМВЛ было выделено два изолята вируса болезни Ауески от домашних животных.

Цель работы – изучение некоторых культурально-биологических свойств выделенных изолятов, в том числе и анализ патологоанатомических изменений при постановке биопробы на кроликах.

Материалы и методы

Культуры клеток

Для проведения эксперимента были отобраны перевиваемые культуры клеток Таурус-1 (Т-1) и почка теленка (ПТ-80). Пересев культуры клеток осуществляли, используя диспергирующую смесь 0,02%-ного раствора Версена (ООО «БиолоТ») с добавлением 0,01% химопсина (ООО «БиолоТ»), а также питательную среду «Игла МЕМ с двойным набором витаминов и аминокислот» (ООО «ПанЭко») с добавлением 0,06% L-глутамина (ООО «ПанЭко») и 10%-ной фетальной сыворотки крупного рогатого скота Cytiva (HyClone).

Методы

Культивирование культур клеток проводили в СО₂-инкубаторе при температуре 37±0,5°С и концентрации СО₂ 5%. Использовали стационарный метод культивирования на полистироловых матрасах с площадью ростовой поверхности 25 см³. Подсчет клеток осуществляли в камере Горяева по общепринятой методике культивирования вируса болезни Ауески.

Для выделения вируса на культурах клеток ПТ-80 и Т-1 матрасы инфицировали (монослой) в дозах 0,1 ТЦД₅₀/кл и инкубировали в течение нескольких суток при температуре 37,0±0,5°С в условиях СO₂-инкубатора с концентрацией СО₂ 5% до проявления цитопатического действия (ЦПД). Инфекционный титр, рассчитываемый по методу Рида и Менча, выражали в lg ТЦД₅₀/см³.

Для проведения биопробы использовали клинически здоровых кроликов массой 2‒2,5 кг. Вируссодержащую жидкость вводили внутримышечно в объеме 1‒2 мл. После производили патологоанатомическое вскрытие и отбирали пробы внутренних органов. Для идентификации вируса болезни Ауески применяли полимеразную цепную реакцию с использованием набора для выявления геномной ДНК вируса болезни Ауески (ООО «Фрактал Био») и набора реагентов «ФБиоНуклео» для выделения НК из клинических образцов (ООО «Фрактал Био»).

Результаты и обсуждение

По результатам исследования было выделено два изолята: №1 – отобранный от кота, павшего на территории Москвы, и №2 – от собаки, павшей на территории Санкт-Петербурга.

Биологическую пробу ставили согласно ГОСТу 25753-83. У кроликов после инкубационного периода (от одних до шести суток) начинался сильный зуд на месте введения. Животные расчесывали и разгрызали зудящие участки тела. В дальнейшем появлялись признаки возбуждения, судороги, слюнотечение. Температура тела оставалась в пределах нормы. На седьмые-восьмые сутки животные погибали с признаками болезни Ауески.

Фото 1. Кровоизлияния в подкожной клетчатке

Фото 2. Гиперемия и отек слизистой трахеи

Фото 3. Гиперемия и кровоизлияния cлизистой кишечника

Фото 4. Полосчатые кровоизлияния в сердце

Фото 5. Точечные кровоизлияния в слизистой оболочке мочевого пузыря

Фото 6. Отек легких, очаги пневмонии

Фото 7. Мозг и его оболочки отечны, кровенаполнены, гиперемированы

Фото 8. Зернистая дистрофия печени

У павших кроликов в местах расчесов наблюдали облысение, кожа в области введения вируса повреждена, подкожная клетчатка геморрагически инфильтрирована (фото 1). Слизистая оболочка трахеи гиперемирована, отечна (фото 2). Желудок переполнен кормовыми массами. Слизистая кишечника гиперемирована, с кровоизлияниями (фото 3). Под эпикардом ‒ полосчатые кровоизлияния (фото 4); в мочевом пузыре на слизистой оболочке видны точечные кровоизлияния (фото 5). Отмечали отек легких, очаги пневмонии (фото 6). Мозг и его оболочки отечны, кровенаполнены, гиперемированы (фото 7). В печени застойные явления, зернистая дистрофия (фото 8). В легких, селезенке, миндалинах, сердце, почках и лимфоузлах обнаруживали множественные очаги некроза. У всех павших животных были патологоанатомические признаки болезни Ауески.

Пробы патологического материала после вскрытия (паренхиматозные органы, кусочки сердца, мочевого пузыря, головного мозга и т.д.) отбирали для вирусовыделения на ПТ-80 и Т-1 и проведения ПЦР-исследования, затем готовили 10%-ную суспензию.

Таблица. Результаты выделения изолята №1 и №2 в перевиваемых культурах клеток ПТ-80, Таурус-1 после проведения биопробы

Примечание: + ‒ выделен вирус Ауески, - ‒ не выделен вирус Ауески.

В таблице представлена динамика выделения изолятов №1 и №2 на перевиваемых культурах клеток ПТ-80 и Т-1, а также средний инфекционный титр вирусов после проведения трех последовательных пассажей.

На первом пассаже наблюдали цитопатическое действие вируса, которое проявлялось в появлении гигантских клеток и лизиса клеток с последующим отслоением от субстрата. Наблюдали ЦПД только из образцов, отобранных из головного мозга, легких, трахеи, почек и печени.

На втором пассаже вирус выделяли из всех перечисленных в таблице внутренних органов, за исключением толстого, тонкого кишечника и сердца.

На третьем пассаже вирус выделяли из всех проб внутренних органов.

Из данных таблицы также следует, что высокую инфекционную активность регистрировали в пробах, взятых из легких, головного мозга, трахеи, почек, печени, ‒ от 7,5 до 8,75 lg ТЦД₅₀/мл. Невысокие инфекционные титры отмечали у образцов патологического материала, полученного из толстого и тонкого кишечника, мочевого пузыря, сердца, что свидетельствует о более низкой информативности данного материала для проведения вирусовыделения с применением культур клеток ПТ-80 и Т-1.

Все полученные пробы после вскрытия и проведенных исследований в культурах клеток ПТ-80, Таурус-1 были идентифицированы методом ПЦР как вирус болезни Ауески. Генетический материал вируса Ауески обнаруживали в образцах патологического материала как после отбора внутренних органов при вскрытии животных, так и после проведения первого пассажа на культурах клеток ПТ-80, Таурус-1, что говорит о более высокой чувствительности метода ПЦР по сравнению с методом вирусовыделения.

Заключение

При изучении патологоанатомических изменений после постановки биопробы на кроликах, зараженных вирусами болезни Ауески, выделенных от домашних животных, было зафиксировано системное поражение многих внутренних органов и тканей: слизистых желудочно-кишечного тракта, слизистых верхних и нижних дыхательных путей, подкожной клетчатки, всех паренхиматозных органов, ‒ вплоть до образования множественных очагов некроза.

Вирус выделялся из всех пораженных органов и тканей в высоком инфекционном титре ‒ от 7,5 до 8,75 lg ТЦД₅₀/мл. Отмечали более низкую информативность проб патологического материала – толстого и тонкого кишечника, мочевого пузыря, сердца. Генетический материал вируса болезни Ауески обнаруживали в пробах патологического материала как после отбора внутренних органов при вскрытии животных, так и после проведения первого пассажа на культурах клеток ПТ-80, Таурус-1, что говорит о более высокой чувствительности метода ПЦР по сравнению с методом вирусовыделения.

Однако у каждого из методов есть свои диагностические преимущества, поэтому в практических ветеринарных лабораториях постановка диагноза может проводиться комплексно с применением нескольких диагностических методов.

Литература

1. Белкин Б.Л. Вирусные болезни животных//Характеристика вирусов, патологоанатомическая диагностика и общие меры профилактики: Учебное пособие/Б.Л. Белкин, В.С. Прудников, Л.А. Черепахина. Орел: Орловский государственный аграрный университет, 2007. 195 с.
2. Долженков В.А. Патоморфология ассоциативного течения болезни Ауески и ротавирусной инфекции у поросят раннего возраста на фоне внутриутробного токсикоза/В.А. Долженков, В.С. Прудников//Аграрная наука ‒ сельскому хозяйству: XIV Международная научно-практическая конференция: Сборник материалов. Барнаул: РИО Алтайского ГАУ, 2019. Кн. 2. С. 284‒286.
3. Коломыцев А.А. Анализ эпизоотической ситуации и эффективности мер борьбы с болезнью Ауески в мире/А.А. Коломыцев, А.А. Стрижаков, И.В. Амирова. Ветеринарная патология, 2008. №1. С. 157–162.
4. Прудников В.С. Вскрытие и патоморфологическая диагностика болезней свиней: Практическое пособие/В.С. Прудников и др. Великие Луки, 2015. С. 185.
5. Трегубова А.А. Болезнь Ауески/А.А. Трегубова, Я.В. Коноферчук, Ю.Д. Кузнецова//Актуальные проблемы ветеринарной медицины и биологической безопасности: Сборник научно-практической конференции, посвященной 90-летию Новосибирского государственного аграрного университета. 2025. С. 230–232.
6. Худорожкова Н.С. Анализ эпизоотической ситуации по болезни Ауески свиней/Н.С. Худорожкова, А.Д. Майзик, С.А. Счисленко и др.//Научное обеспечение устойчивого развития агропромышленного комплекса: Сборник материалов Международной научно-практической конференции, посвященной памяти академика РАН В.П. Зволинского и 30-летию создания ФГБНУ «ПАФНЦ РАН». Соленое Займище: Прикаспийский аграрный федеральный научный центр РАН, 2021. С. 1531‒1536.
7. Шевцов А.А. Болезнь Ауески свиней, современная эпизоотическая ситуация, меры борьбы и профилактика/А.А. Шевцов, Е.П. Баборенко, И.В. Шевченко, А.В. Константинов. Ветеринария сегодня, 2012. №3(3). С. 16–19.
8. Lari A. Pseudorabies virus in European wild boar from central Italy/A. Lari, D. Nigrelli, E. Brocchi et al. J. Wildl. Dis., 2006. Vol. 42. №2. P. 319–324.
9. Liu A. Pseudorabies virus associations in wild animals: Review of potential reservoirs for cross-host transmission/A. Liu, T. Xue, X. Zhao, J. Zou et al. J. Viruses, 2022. Vol. 14. 2254 р. https://doi.org/10.3390/v14102254.
10. Kmetiuk L.B. Serosurvey for Pseudorabies (Aujeszky's disease) in free-range wild boars (Sus scrofa) of Brazil/L.B. Kmetiuk, E.M.C. Villalobos, M.H. Lara, F.P. Machado et al. J. Wildl. Dis., 2020. Vol. 56. №4. P. 959–961. https://doi.org/10.7589/2019-10-262.
11. Vengust G. Presence of antibodies against Aujeszky’s disease virus in wild boar (Sus scrofa) in Slovenia/G. Vengust, Z. Valencak, A. Bidovec. Journal of Wildlife Diseases, 2005. Vol. 41. №4. P. 800‒802.

Скачайте в формате .pdf >>>